特殊染色的价值：

（1）重要性——肝脏疾病、肾脏疾病、感染性疾病等诊断中是不可缺少的辅助染色之一。

（2）不可替代性——色素、脂质、组织内沉着物、糖类等染色有着不可替代的作用。

一、了解染色的应用范围、熟知所染物质的形态结构

一个特殊染色的价值在于它在病理诊断及鉴别诊断中的作用。

如早期肝硬化诊断中Masson三色染色有助于确定其纤维增生的程度；原位癌与早期浸润癌可通过网状纤维染色观察其基底膜是否完整来判断；特别是对感染性疾病病理诊断如真菌、幽门螺杆菌等感染的判别有重要价值。

二、选择好染色的方法

因特殊染色方法具有多重选择性，选择一个好的染色法尤为重要。选择染色方法应遵循：

1、特异性高、传统或经典的染色方法；

2、染色流程相对简便、染液易配制的染色方法；

如显示胃幽门螺杆菌，硝酸银染色菌体着色较好，但操作繁琐费时，工作中多使用碱性品红法、硼酸亚甲蓝法等其他方法。目前我科使用的亚甲蓝染色操作时长一分钟即可镜下观察。染液配置也十分简单。

3、染色结果对比鲜明、结果易保存、阳性突出的染色方法；

4、两种染色能够相互印证一个物质的染色方法。

三、严格掌握好染液的配制

1、所有染液配制均需使用蒸馏水，保证其pH，所用容器必须洁净。

如配制氢氧化银氨染液、无色品红染液所用容器须使用清洁液彻底清洗干净。并且这两种染液需暗室放置。

2、染色中主要染液的浓度和量，必须严格按照规范、权威专著所要求配制，不可随意改动。

如Masson染色是根据染液中试剂分子量大小而着染不同组织，若配制染液时所用试剂分子量选择错误，可能导致染色的失败；在网状纤维染色中，配制氢氧化银氨染液时，氢氧化铵的量多与少均会影响染色的结果。

3、自行改良的染色法，需经过大量病例来验证其有效性。

4、考虑试剂的稳定性，合理的配制用量。用量小及易失效的染液尽量以小剂量来配制。

一些染液容易失效：如氢氧化银氨、醛品红、核固红、橙黄G等染液一般使用几周至几个月；VG、胶体铁、六胺银等染液等均

5、染液配制完成后，须进行阳性对照验证，合格后标明染液名称、浓度、配制日期、有效期限，并根据要求保存，失效后立即废弃。

大部分染液有效期限没有固定要求，失效立即更换。

6、配制过程中要熟知所用化学试剂性质，还要考虑到试剂的危险性，做好相应的防护及环保措施。

如苦味酸，经震动、遇明火高温等情况有引起爆炸的危险，属危险化学品，储存和使用均须特别注意。

四、熟知染色原理、保证染色流程准确

1、熟知染色原理，才能掌控好染色过程中的各环节。

如醛品红染色，不同的前处理即显示不同物质；Masson染色前Bouin液作用对其有非常重要的意义。

2、大部分组织染色以石蜡切片为主，厚度在4～6um，少部分须以冰冻切片进行染色。

3、染色步骤及时间以技术操作规范为标准，做到准确、无误。

若染色批量小，工作中多采用滴染的方式进行；若染液为醇溶性（如醛品红、苏丹等）、染色时间长、加热染色等则应在立式染缸内以浸染的方式进行。染色时间以染液的新旧程度、室温条件来控制在某一个时间点或时间段范围内。

4、染色过程中需随时在显微镜下观察控制染色情况，特别是对于加热、分化、复染等步骤。

五、对染色结果的初步观察

染色完成后首先判断阳性对照是否有效，有效后方能进行判读所染结果（若对照不正确，染色结果无论是阳性还是阴性，不可进行判断）。

对于对照不准确及不合格的染色，必须进行认真分析，查找失败的原因，重新进行染色。

判读需熟知：所用方法结果的表达、定位；组织自身生物学形态。

六、做好室内质量控制

为保证染色结果的准确性和可靠性，室内质量控制是不可缺少的重要环节。

特殊染色室内质量控制主要是以设立对照为主，对照包括阳性对照、内对照等，阳性对照是特殊染色中应用最广泛的对照。

1、染色时，在待染组织旁加阳性对照，这能够确保每张切片的准确性。

2、相同的染色每批次加一张相应的阳性对照。

七、不断总结经验及持续改进

在规范操作的同时，多查询相关资料；注重原理、关键步骤及细节，多实践；寻找可改进的步骤及方法。（病理科 窦丽珍）